斯法|愿您可以被生活温柔以待!

质粒是什么,质粒是什么,三分钟教你轻松弄懂质粒的含义

质粒是基因工程中常用的载体,也是生物学实验的基本要素,正确的阅读质粒图谱是实验的第一步,对于实验小白,本文教你如何快速破译质粒图谱。

首先,熟悉你所感兴趣的质粒

让我们从一个经典的质粒pBR322开始,由于它具有成功克隆所需要的所有特性,因此常被用作衍生载体的主干。从图谱中心可以看到,线性化质粒的大小为4361个碱基对。在开始处理任何质粒之前,建议使用一种独特的限制性内切酶将其线性化,以检查大小是否与预期大致相同。

破译质粒图谱需要掌握哪些知识点呢?破译质粒图谱需要掌握哪些知识点呢?

黑色箭头表示转录的方向,这是克隆所必需的。如果你在另一个基因的中间克隆了你的目的基因,请确保这两个基因的转录方向相同。否则,本地启动子会干扰你的基因表达。

“Ori”是什么意思?

在诸如Entrez-PubMed这样的基因序列数据库中,质粒序列以线性序列的形式从ori序列开始绘制。“Ori”指质粒复制的起点,不能改变它,一旦质粒不能复制,则是无用的。

关于ori要记住的另一件事是,同源质粒常常是不相容的。这意味着你将无法在一个细胞中维持两个pBR323衍生的载体,即使它们具有不同的抗生素耐药性基因。pBR322 ori也被用于pUC18,真核生物载体中第二常见的主干。

限制性位点在哪里找?

相应酶的限制性位点用起始核苷酸位置的垂直线表示。这些位置应该是唯一的,但值得一查,因为衍生载体通常包含额外的被遗忘的序列。

关于抗生素抗性基因

pBR322有两种抗性基因:tet(四环素耐药)和amp(氨苄青霉素耐药)。这些基因分别编码一个外排泵(tetR)和β-内酰胺酶(ampR)从细胞中排泄四环素和氨苄青霉素。Tet和amp从不同的方向阅读。

记住,β-内酰胺酶对青霉素类抗生素的解毒没有特异性。所以即使你有两个不同复制起点的质粒,如果一个表达了甲氧西林耐药基因另一个表达了氨苄青霉素抗性基因,你也不能同时选择两个质粒。

当使用限制性内切酶位点将目的基因克隆到质粒时,要注意哪些位点属于你的抗生素抗性基因。例如,BamHI在TetR的中间酶切。我们都知道,基因的破坏会导致基因功能的失活——在这种情况下,就是抗生素耐药性。

复制如何开始和停止?

质粒除了基因外,通常还包含转录启动子和终止子来自E.coli噬菌体。噬菌体SP6和T7的启动子常用于体外RNA扩增。它们需要噬菌体聚合酶,因此在体内不活跃。

下图为爪蟾卵母细胞表达载体pTLNX的表达图谱。除了常见的pBR322 ori和抗生素耐药基因AmpR和CmR(氯霉素耐药)外,还存在SP6和lacUV启动子。在SP6启动子下游,rrnBT2终止子允许克隆到多克隆位点的基因有效终止。

破译质粒图谱需要掌握哪些知识点呢?破译质粒图谱需要掌握哪些知识点呢?

pTLNX载体还具有质粒选择基因(ccdB),以及病毒SV40核定位信号和Xenopus globine 3 ‘ UTR,允许克隆基因的高表达。

质粒图谱总是在进化,最好使用已知的图谱资源库,如Addgene、Entrez-PubMed等,以免忽略一些“不重要”的特性,而这些特性对您的实验可能是至关重要的。

创业分享·资讯
  • 房祖名为什么姓房,房祖名为什么姓房,带你揭秘其背后的真实原因

    房祖名为什么姓房,房祖名为什么姓房,带你揭秘其背后的真实原因

    了解娱乐圈的朋友们都有一个疑问:国际巨星成龙的儿子为什么叫房祖名?怎么没听说成龙姓房呢?其实,成龙的儿子确实姓房,这其中还有一段不为人知的往事,与成龙的父亲有关。成龙的父亲出生在1914年,那是一段动荡不安的岁月,清政府刚刚被铲除,整个社会笼罩着一种新旧交替的氛围。房道龙并没有什么雄心壮志,他出生在一个穷苦的家庭中,家庭环境很糟糕,平时能填饱肚子就好。可当时的社会太乱了,房道龙心心念念的家乡,在战

    2021-06-08 12:00:38创业分享

    阅读更多
  • 邝洁楹,tvb是什么意思,带你揭秘tvb电视剧的名称由来

    邝洁楹,tvb是什么意思,带你揭秘tvb电视剧的名称由来

    相信大家最近肯定看到一个非常让人疑惑的娱乐新闻,香港娱乐传媒HK01选评出了TVB的10大新生代小花分别是江嘉敏、冯盈盈、邓佩仪、刘颖璇、邝洁楹、苏韵姿等人。让人非常疑惑的这些所谓的明星艺人大多数粉丝连见都没见过,而且识别度非常的低,小编都快搞不清楚这群人是谁了。不是小俊看不好TVB,按照TVB目前的这样走的话肯定是下坡路的。虽然这几年拍出来的电视剧仍然比内地的电视剧好看的多,但是明显水准已经不如

    2021-06-08 11:17:56创业分享

    阅读更多
  • 兰卡斯特大学世界排名,兰卡斯特大学世界排名第几,带你解析兰卡斯特大学有多厉害

    兰卡斯特大学世界排名,兰卡斯特大学世界排名第几,带你解析兰卡斯特大学有多厉害

    英国留学圈大家都知道,一直有所学校,各方面都很棒,因为低调,新闻报道不算太多。但这可不妨碍它凭自己的实力说话,这么多年,学术成果、校园环境优秀,排名最高可是排到过英国大学排名榜第六哦。是的,这就是立思辰留学云小编今天要介绍的大学——兰卡斯特大学!这所大学这么多年,专注提升科研实力、教学水平、校园环境。学校简介与学术成就兰卡斯特大学(LancasterUniversity)建于1964年,是一所位于

    2021-06-08 10:24:50创业分享

    阅读更多
  • 空心爱心符号,爱心符号怎么打,三分钟教你快速打出爱心符号

    空心爱心符号,爱心符号怎么打,三分钟教你快速打出爱心符号

    我们在很多地方会看到有各种心形符号,比如♥♡Y♡♥……这几种有点不一样,那是因为用了不同的方法打出来的。下面教大家两类简单的方法打出心形符号来~方法/步骤第一类是用word文档来插入,下面介绍WPS文字,而其他word版本中,方法也是一样的,只是位置稍微有点不同。在插入里,选择“符号”:再选择“其他符号”:在符号选项中的“字符”列表里,选择Webdings:可以看到,里面有Y,点击此Y,再点击插入

    2021-06-08 09:48:57创业分享

    阅读更多
  • 屁颠屁颠是什么意思,女人说的绿茶啥意思,两种绿茶暗语你懂吗

    屁颠屁颠是什么意思,女人说的绿茶啥意思,两种绿茶暗语你懂吗

    你的朋友圈里有没有这样的女生?年龄不大,刚毕业一两年的样子。长相漂亮,身材苗条,朋友圈里经常晒各种高逼格的局,各种海岛比基尼,各种高端酒廊餐厅照。正常情况下这个年纪的女孩子该做的事,她好像一样也不用做。不用找工作,不用租房子,不用加班不用挤地铁。你觉得她应该是白富美,但她常会在夜深人静时发一些性感诱惑的照片,发的文字内容似乎又不像白富美会说的话。其实这种女人,就是我们说的绿茶婊。所谓绿茶婊就是那些

    2021-06-08 09:03:59创业分享

    阅读更多
  • 全国有多少党员,党员有多少人,2020年中国党员数据最全分析

    全国有多少党员,党员有多少人,2020年中国党员数据最全分析

    9059.4万名党员!中央组织部最新党内统计数据显示,截至2018年底,中国共产党党员总量突破9000万。中央组织部最新党内统计数据显示,截至2018年底,中国共产党党员总数为9059.4万名,比上年净增103.0万名,增幅为1.2%。党的基层组织461.0万个,比上年增加3.9万个,增幅为0.8%。从1921年中国共产党成立时的50多名党员,到1949年新中国成立时的448.8万名党员,再到20

    2021-06-08 08:01:36创业分享

    阅读更多
  • 推荐个网络游戏玩玩,推荐个网游玩玩,这几款游戏带给你视觉上的享受

    推荐个网络游戏玩玩,推荐个网游玩玩,这几款游戏带给你视觉上的享受

    在这里我们是朋友,聊天侃地,在这里我们可以无拘无束的发言,不会有任何人阻挠,还有大家最喜欢吐槽的小编,请把口水收集好,随时准备和小编一起吐槽!最新网络游戏排行榜,玩过很多游戏,感觉这游戏才是最公平的!那就是英雄联盟。玩过很多游戏,感觉英雄联盟是最公平的,所有英雄都可以玩,皮肤没有任何属性。起码这游戏不充钱的人能跟充钱的人打。其他游戏不充钱就不能打架了!网游玩累了,steam单机半年换一个,比网游氪

    2021-06-07 17:54:15创业分享

    阅读更多
  • 2014最好用的bb霜,好用的bb霜有哪些,十大最好遮瑕保湿bb霜

    2014最好用的bb霜,好用的bb霜有哪些,十大最好遮瑕保湿bb霜

    十款BB霜总有一款值得你拥有BB是BlemishBalm的缩写,意思是伤痕保养霜,最初是德国人为接受镭射治疗的病人设计的,含护肤和防晒成分,能使其受损肌肤能得到修复与再生。BB霜功效强大,有遮瑕保湿等多重功效,深受很多女性的喜爱,但是由于天气的影响,皮肤干燥,暗沉,此时,有强大保湿效果的BB霜就隆重登场了。既能完美遮瑕,又能保持肌肤水嫩,湿润,一整天都漂漂亮亮大,美美哒。1.ZEESEA滚轮BB霜

    2021-06-07 17:12:57创业分享

    阅读更多
  • sensitive是什么意思,sensitive是什么意思,sensitive的用法及中文翻译

    sensitive是什么意思,sensitive是什么意思,sensitive的用法及中文翻译

    英语中有很多单词长得很相似,但意思却是大不相同。但这些词却让众多刚接触英语或是正在努力学习英语的小伙伴们很是头疼~今天我们就一起来学习一组容易混淆的词组“sensible”和“sensitive”的不同以及用法~Sensible/ˈsensəbl/sensibleadj.明智的;通情达理的;合乎情理的Itreferstosomeonewhocanmakegoodjudgements,andhisb

    2021-06-07 16:19:15创业分享

    阅读更多
  • 十大u盘品牌排行榜,u盘质量排名前十的有哪些,照着这些清单买准没错

    十大u盘品牌排行榜,u盘质量排名前十的有哪些,照着这些清单买准没错

    随着科技的发展,u盘也随之普及普及,当前U盘市场的空前火爆,面对品牌众多、功能各异的U盘产品,u盘什么牌子好呢?我们今天就来看一下吧。u盘什么牌子好?没有最好,只有更好。金士顿,东芝,台电,迪士尼,联想,清华紫光,现代等等。我用过的,做个比较,从客观上,日货质量比较好。金士顿的假货多,国货的小问题不断,国货中台电的质量还不错。建议买质保时间长的,因为什么呢?敢保的时间越长,说明他们对于质量越有自信

    2021-06-07 15:42:51创业分享

    阅读更多